【研究領域課題番号】18K08151 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

高性能イミュノトキシン / モノクローナル抗体 / 肺上皮前駆/幹細胞 / 選択な培養 / 慢性閉塞性肺疾患の治療 / 選択的培養 / 肺上皮幹細胞 / イミュノトキシン / 抗体 / 選択的培養法 / 選択的な培養 / 特発性肺線維症の治療

【研究成果の概要】

呼吸器領域において、特発性肺線維症あるいは慢性閉塞性肺疾患などは治療法が確立されていない予後不良の慢性進行性疾患である。肺を構成する肺上皮幹細胞を移植することが出来れば、新たな治療法になり得ると考えイミュノトキシンを用いた選択的培養を考案した。CD90-DT3C（イミュノトキシン）を添加することで肺上皮前駆/幹細胞が選択的に培養することが可能であった。また、A83-01ならびにY27632を加えて培養することで更に培養効率が上がった。以上のことからイミュノトキシンを用いた選択的培養が完成した。この培養系を利用した慢性閉塞性肺疾患の治療法開発を進める。

【研究の社会的意義】

正常ヒト肺組織由来細胞を用いた肺上皮幹細胞の培養については殆ど報告が無く、イミュノトキシンを利用した細胞の選択については皆無である。イミュノトキシンは内在化能を有する抗体があれば簡単に目的の細胞を排除することができ汎用性がある。この研究が成功することで国内外における培養技術は飛躍的な進化を遂げる可能性がある。
また、高齢者に多発する慢性閉塞性肺疾患の治療に応用可能で治療を受けている国内患者数で約26万人、推定患者数は実に500万人以上である。これらの特発性肺線維症、肺気腫などの慢性閉塞性肺疾患の治療に応用できる可能性が高い。今後は臨床応用に向けた研究を進めたいと考えている。

【研究種目】基盤研究(C)

【研究期間】2018-04-01 - 2021-03-31

【配分額】4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)

【研究分野】水産化学

【研究領域課題番号】17380124 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

魚貝類 / アレルゲン / パルブアルブミン / トロポミオシン / コラーゲン / cDNAクローニング / 抗体 / IgE結合エピトープ / モノクローナル抗体

【研究成果の概要】

1. 4種甲殻類(ホッコクアカエビ、ケガニ、ナンキョクオキアミ、ミネフジツボ)および10種貝類(クロアワビ、サザエ、エゾボラ、アカガイ、マガキ、トリガイ、ウバガイ、ミルクイ、マテガイ、アサリ)のトロポミオシン(TM)の全一次構造をcDNAクローニングにより明らかにした。ミネフジツボTMのアミノ酸配列は特異であったが、その他の3種甲殻類のTMは既知の甲殻類TMのアミノ酸配列と90%以上の高い相同性を示した。一方、貝類TMのアミノ酸配列は甲殻類、頭足類とは著しく異なり、また貝類間でも配列相同性は科(または目)レベルでのみ高いことを認めた。
2.マサバパルブアルブミン(PA)のIgE結合能はCa^<2+>除去により著しく低下すること、Ca^<2+>結合にとって重要なAsp-51およびAsp-90をAlaに置換した改変PAのIgE結合能は天然PAより弱いことを認め、PAの主要なIgE結合エピトープはCa^<2+>結合と関連した高次構造に依存すると推定した。
3.マサバPAの一次構造上のIgE結合エピトープは21-40の領域に、ニジマスコラーゲンα2鎖のIgE結合エピトープは941-968の領域に、スルメイカトロポミオシンのIgE結合エピトープは113-132、185-204および265-284の領域に含まれることを明らかにした。
4.ブラックタイガーに20kDaの新規アレルゲンを検出し、部分アミノ酸配列分析によりsarcoplasmic calcium-binding proteinと同定した。
5.パルブアルブミンのECL-WB法による微量検出法を確立し、魚類コラーゲン製品に極少量のパルブアルブミンが混入する可能性を明らかにした。
6. 5種の10-12アミノ酸残基ペプチドをモデルとして抗体作製を検討し、魚類アレルゲンB細胞エピトープに対する特異的抗体作製法を確立した。

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】2005 - 2006

【配分額】14,200千円 (直接経費: 14,200千円)

【研究分野】食品科学

【研究領域課題番号】15380091 (KAKENデータベースで見る）

【研究キーワード】

脂溶性異物 / 脂質過酸化物 / アルデヒド / 解毒酵素 / 抗体 / 免疫化学 / 植物野菜 / ファイトケミカル / 脂質酸化物 / モノクローナル抗体 / 野菜 / 免疫科学 / 植物生理活性物質 / 食物生理活性物質

【研究成果の概要】

機能性食品成分による解毒酵素遺伝子発現の分子機構解析:ワサビ由来成分6-methylsulfinylhexyl isothiocyanate(6-HITC)による解毒酵素(グルタチオン S-トランスフェラーゼ)誘導において、各種GSTアイソザイムのうち、GST-P1のみNrf2及びKeap1の過剰発現の影響をほとんど受けないことを明らかにし、さらに細胞内タンパク質代謝に重要な役割を果たすプロテアソームの関与を示唆する結果を得た。
腸管上皮細胞における解毒酵素遺伝子発現機構の解析:Caco-2細胞を用いてワサビに含まれる機能性食品因子6-HITCによる消化管での解毒酵素発現誘導機構について検討した。その結果、分化Caco-2細胞において抗酸化酵素であるヘムオキシゲナーゼ-1(HO-1)の発現が、Nrf2の核への集積と相関することを見いだし、6-HITCはNrf2を介してHO-1発現を誘導していると考えられた。また、未分化細胞でのHO-1の発現が、分化細胞に比べて、遅いシグナル経路により誘導されていることが判明した。この結果から、6-HITCに対するCaco-2の細胞の応答性は、分化程度により異なっていることが予想された。アクチン細胞骨格形成は分化、未分化細胞で異なっていると考えられ、6-HITCがアクチン細胞骨格形成に影響するのであれば、その応答性は異なると考えられる。今後、6-HITCがアクチン細胞骨格あるいはアクチン細胞骨格形成に与える影響についても検討する必要がある。

【研究種目】基盤研究(B)

【研究期間】2003 - 2005

【配分額】14,800千円 (直接経費: 14,800千円)