Discovery Sagaサイレントキーワード俯瞰

プロラクチン / 遺伝子発現 / 免疫組織化学 / in situ PCR / プロラクチン受容体 / in situ RT / PCR / 組織化学 / 脳室 / ホルモン

我々は本研究においてマウスの腎臓の間質細胞がプララクチン(PRL)遺伝子を発現していることを明らかにした。腎臓の間質は、形態学的に何種類かに分類されているが、その中でも、繊維芽細胞様の1型間質細胞がmPRLを産生していると考えられる。また、我々は抗-mPRL受容体抗体を作製し、免疫組織的にmPRL受容体蛋白質の局在を調べた。この結果、尿細管の刷子縁と間質細胞の細胞膜にmPRL受容体が局在する事が明らかになった。恐らく尿細管の刷子縁に存在するmPRLーRは糸球体より濾し出されてきた脳下垂体由来のmPRLを再吸収するためにあると考えられる。これに対し、間質細胞の細胞膜に局在する受容体は間質自身が産生したmPRLを自ら受け取り、パラクリン・オートクリンの様式で働いているのではないかと推察される。また、脳下垂体においてPRLの転写調節に重要な役割を担っているのはPit-1呼ばれる転写因子である。我々は腎臓の間質細胞におけるmPRLの転写にやはりPit-1が関係しているのではないかと予想し、検索を行った。その結果、mPit-1の局在はmPRLのそれと一致し、mPit-1が腎臓の間質におけるmPRLの転写に関わっている可能性が示唆された。

高度好塩性古細菌 / 細胞表層糖タンパク質 / 遺伝子クローニング / 遺伝子発現 / PCR

Haloarcula japonica TR-1株は、石川県塩田土壌より分離された三角形平板状の形態を有する高度好塩性古菌一種である。本研究では、その形態維持機構の解明を目的として、H.japonica細胞表層の解析を行った。H.japonicaの細胞表層画分を電気泳動にかけたところ、本菌の細胞表層には分子量約17万の糖タンパク質(Cell Surface Glycoprotein:CSG)が多量に存在することがわかった。また、三角形平板状に生育させた菌を含む培地からマグネシウムイオンを除去したところ、菌は球状に変化した。菌の形態変化に伴い、CSGの菌体からの遊離が認められた。以上より、CSGは本菌の形態維持に密接に関与していることが強く示唆された。H.japonicaの細胞表層よりCSGの精製を行い、糖含量およびアミノ酸組成を明らかにした。次に、類縁菌由来のCSG遺伝子との相同性を想定することにより、本菌CSG遺伝子のPCRによる増幅を試みた。既報の類縁菌CSG遺伝子の相同領域に対応する合成DNAをプライマーとして用い、H.japonica染色体DNAを鋳型とするPCRを行った。その結果、約900塩基対のDNA断片が増幅され、本菌CSG遺伝子の一部と考えられた。そこで、H.japonica染色体ライブラリーを作製し、PCR産物をプローブとするコロニーハイブリダイゼーションおよび遺伝子ウォーキングを行い、CSG遺伝子全域を含むDNA断片のクローニングすることができた。さらに、本菌CSG遺伝子の大腸菌における発現にも成功した。

【研究分担者】
小川元之	慶応義塾大学	医学部	助手	(Kakenデータベース)
平岡芳樹	慶応義塾大学	医学部	講師	(Kakenデータベース)

【研究分担者】
中島春紫	東京工業大学	生命理工学部	助手	(Kakenデータベース)
青野力三	東京工業大学	生命理工学部	助教授	(Kakenデータベース)
堀越弘毅 (掘越弘毅	堀越弘穀)	東洋大学	工学部	教授	(Kakenデータベース)