Discovery Sagaサイレントキーワード俯瞰

ツメガエル（ゼノパス）の成体の造血は，肝臓，脾臓，骨髄の複数の造血器が分担して血球を産生する。そのため複数造血器の役割分担や組織環境の違いを解明するための魅力ある研究対象である。ツメガエルの各血球，すなわち赤血球，白血球，栓球（哺乳類の血小板の機能を担う細胞）はいずれも造血幹／前駆細胞（HSPC）が起源である。本研究では複数の造血器に存在するＨＳＰＣの特性の解明と分離法を確立しつつある。第２年度では第1年度で検討した細胞膜蛋白質を網羅的に同定するプロテオミクスにおいて、試料調製における界面活性剤処理の条件をさらに検討した。例えば飼育温度環境が異なるアフリカツメガエルの赤血球膜蛋白質をモデルにすると，飼育温度の違いによって，量的変動を示す赤血球膜上の膜蛋白質が比較解析可能になった。従ってこの方法を適用して複数臓器間のHSPC膜発現分子の差異が検出可能であると考えた。また細胞にレーザー光を照射して得られる散乱光とモノクローナル抗体２種の結合による蛍光を利用するフローサイトメトリーを用いて、肝臓ＨＳＰＣの分離法を検討した。再現性の確保が課題になるがN/C比が大きく未分化な細胞形態をもつ集団は，実験実施者に依存せずに再現性良く分離可能であった。このように進捗していたところ，シングルセルRNA-Seq（scRNA-seq）法によって１細胞単位で発現する全mRNAを同定，定量，分類する報告が相次いた。本研究の発展にとって，これらの新手法は大きな貢献をもたらすと判断し，特に肝臓，骨髄のＨＳＰＣを対象とするscRNA-seqを実現するための準備に入った。そのうち肝臓，骨髄それぞれの臓器からmRNAを回収するプロトコルをほぼ確定し，まずバルクmRNA解析に着手した。

【研究分担者】
前野貢	新潟大学	自然科学系	教授	(Kakenデータベース)