Discovery Sagaサイレントキーワード俯瞰

有機溶剤 / 代謝 / 遺伝子多型 / ジクロロメタン

本研究の研究計画に対し,慶應義塾大学医学部倫理委員会の承認を得たのち,研究を開始した.本年度は,ジクロロメタン(DCM)曝露作業者における疫学調査を実施し,その評価を行った.(1)曝露指標の有用性評価:2年間にわたって繰り返しDCM個人曝露濃度(DCMexp)および尿中ジクロロメタン濃度(DCMu)をGC-MS法により測定し,計128データを得た.この両指標の回帰直線は,(DCMu)=0.004x(DCMexp)+0.02(回帰係数のP値<0.001)であった.この場合の曝露濃度50ppmに相当するDCMuは0.2mg/Lと推定される.また,両指標に加えて血液中ジクロロメタン濃度(DCMb)を測定することのできた78データについて曝露指標間の関係を検討したところ,(DCMb)=0.013x(DCMexp)+0.02(P値<0.001),曝露濃度50ppmに相当するDCMbは0.65mg/Lと推定された.以上から,DCMb, DCMuとも,DCM曝露の生物学的曝露指標として有用であると示唆された.(2)遺伝子多型を考慮した血液中ホルムアルデヒド濃度(HCHOb)への影響:上記曝露指標に加え,HCHOb測定ならびにGSTT1遺伝子多型測定を行った39データで,GSTT1遺伝子多型がDCM曝露とHCHOb濃度との関係に与える影響を検討した.39名中GSTT1(+)が24名,(-)が15名で,両群のDCM曝露に差はなかった(30ppm).HCHOb濃度も,GSTT1(+)群0.97mg/L, GSTT1(-)群1.52mg/Lで有意な差は認められなかった.DCMexpとGSTT1多型を説明変数とした重回帰分析によっても有意な説明変数とはならなかった.以上から,本曝露濃度レベルにおいては,GSTT1+群のHCHOb濃度は,GSTT1-群と比較で有意な差はないと考えられる.

DNAチップ / 発現プロファイル / 種差 / トリクロロエチレン / ジクロロメタン / 初代培養幹細胞 / DNAマイクロアレイ / 有害化学物質 / 代謝

平成12年、13年度には、種差があり、マウスで肝に発がん性のあるトリクロロエチレン(以下TCE)及びジクロロメタン(以下DCM)をマウス及びラットに曝露し、擬陽性が低く再現性が高いとされる、遺伝子及びESTの収載されたAffymetrix社のDNAチップを用いて肝の遺伝子発現プロファイルを得て、その解析を行った。TCE腹腔内投与実験のマウスでは、細胞増殖制御機構への変調が生じている兆しが見えたが、ラットでは脂質代謝の活性化が見えたに過ぎなかった。TCE経口投与実験では、経時的な観察により、ペルオキシゾーム増殖薬によって誘導される遺伝子の発現の増加を見た。また、リアルタイムPCR法によってDNAチップの精度を確認し、発現の変化したESTについてクローンを購入し塩基配列を読んだ。DCM経気道投与実験では、ラットにCYP2E1の発現亢進が見られた。種間の遺伝子発現プロファイルを比較するため、相同遺伝子検索プログラムを作成、TCE曝露実験で有意差があったプローブについて相同遺伝子を検索し、マウスとラットの遺伝子が対応する新たな遺伝子発現プロファイルを作成した。この遺伝子発現プロファイルに対して階層的クラスター解析を行ったところ、マウスとラットはほぼ明確に区別された。本課題の最終目的は、有害化学物質による健康障害の評価を動物実験で行う際に、どの種を用いればよりヒトに近いか、遺伝子の発現プロファイルを用いて評価することの可能性を判断することであり、マウス、ラット、ヒトの新鮮初代培養肝細胞を用いた比較実験の計画を立てた。マウスで、チトクローム系酵素の代謝活性が保たれている系を構築し、予備実験を経て、TCE曝露実験を行った。in vitro実験での曝露条件はin vivo実験の結果を踏まえ、リアルタイムPCR法て決定した。ヒトの細胞はアメリカより入荷を待っている。

【研究分担者】
中島宏	慶應義塾大学	医学部	助手	(Kakenデータベース)
西脇祐司	慶應義塾大学	医学部	助手	(Kakenデータベース)
武林亨	慶應義塾大学	医学部	専任講師	(Kakenデータベース)